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人正常前列腺基质永生化细胞的特性及用途!
www.yiqi800.com  2020-11-02 06:00  北京百欧博伟生物技术有限公司

人正常前列腺基质永生化细胞的特性及用途!


人正常前列腺基质永生化细胞是通过一个pRSTV质料结构用SV40大T抗原对基质细胞进行永生化。肌成纤维基质细胞株, www.yiqi800.com WPMY-1与RWPE-1细胞一样来源于同一张成人前列腺组织切片的周围区域的基质细胞。


一、细胞特性

1)来源:前列腺

2)形态:成肌细胞贴壁生长

3)含量:>1x106 个/mL

4)污染:支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性

5)规格:T25瓶或者1mL冻存管包装


二、运输和保存

可选择干冰运输及发送复苏存活细胞方式

1)干冰运输收到后立即转入液氮或者-80度冰箱冻存或直接复苏;

2)存活细胞收到后应继续生长传代达到细胞生长状态良好时再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。

3)收到细胞后请拍照3天内如果发现污染,请及时拍照与我们。


三、细胞接受后的处理:

1)收到细胞后请检查是否漏液如果漏液请拍照片发给我们。

2)请先在显微镜下确认细胞生长状态去掉封口膜并将T25瓶置于37℃培养约2-3h。

3)弃去T25瓶中的培养基添加6ml本公司附带的完全培养基。

4)如果细胞长满(90%以上)请及时进行细胞传代传代培养用6ml本公司附带的完全培养基。

5)接到细胞次日请检查细胞是否污染若发现污染或疑似污染请及时与我们取得。


四、人正常前列腺基质永生化细胞的用途:仅供科研使用。


细胞培养操作规程供参考

1、培养基及培养冻存条件准备:

1)准备DMEM培养基;胎牛血清5%;双抗1%。

2)培养条件: 气相:空气95%;二氧化碳5%。 温度:37℃培养箱湿度为70%-80%。

3)冻存液:90%血清10%DMSO现用现配。

2、细胞处理:

1)复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于冻存管盖部)摇晃解冻移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟弃去上清液加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。

2)细胞传代:如果细胞密度达80%-90%即可进行传代培养。

3)细胞冻存:待细胞生长状态良好时可进行细胞冻存。


对于贴壁细胞传代可参考以下方法:

1、弃去培养上清用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

2、加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中置于37℃培养箱中消化1-2分钟然后在显微镜下观察细胞消化情况若细胞大部分变圆并脱落迅速拿回操作台轻敲几下培养瓶后加入3ml此细胞的培养基终止消化。

3、轻轻吹打后吸出移入15ml离心管中在1000RPM条件下离心4分钟弃去上清液加入1mL培养液后吹匀。

4、移入到事先准备好的含有5ml培养基的T-25培养瓶中或含有14ml培养基的T-75培养瓶中培养。


下面T25瓶为例;

1、细胞冻存时弃去培养基后PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶细胞变圆脱落后加入2ml完全培养基终止消化可使用血球计数板计数。

2、1000RPM离心5分钟去掉上清。用血清重悬浮加DMSO至zui终浓度为10%。加入DMSO后迅速混匀按每1ml的数量分配到冻存管中注意冻存管做好标识。本公司按每个冻存管细胞数目大于1X106个细胞冻存。

3、人正常前列腺基质永生化细胞将冻存管置于程序降温盒中,放入-80度冰箱至少2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。


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