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人真皮微血管内皮细胞的培养及注意事项!
www.yiqi800.com  2020-12-31 12:01  北京百欧博伟生物技术有限公司

人真皮微血管内皮细胞的培养及注意事项!

一、细胞简介

平台编号:bio-105894

规格:1ml/T75

拉丁属名:HDMEC(人真皮微血管内皮细胞)

细胞名称:人真皮微血管内皮细胞

注意事项:仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗非药用非食用


二、细胞特性

种属来源:人

组织来源:真皮

疾病特征:正常

细胞形态:内皮细胞样

生长特性:贴壁生长

含量:>1x106 个/mL

污染:支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性

规格:T75瓶或者1mL冻存管包装

培养基:内皮细胞培养基

生长条件:气相:空气95%;二氧化碳5%; 温度:37 ?℃,

传代方法:1:2至1:6每周2次。

冻存条件:90% 完全培养基+10% DMSO液氮储存

支原体检测:阴性

细胞用途:仅供科研使用。


三、HDMEC人真皮微血管内皮细胞接受后处理

1) 收到细胞后请检查是否漏液 如果漏液请拍照片发给我们。

2) 请先在显微镜下确认细胞生长状态去掉封口膜并将T25瓶置于37℃培养约2-3h。

3) 弃去T25瓶中的培养基添加 6ml本公司附带的完全培养基。

4) 如果细胞密度达80%-90%请及时进行细胞传代传代培养用6ml本公司附带的完全培养基。

5) 接到细胞次日请检查细胞是否污染若发现污染或疑似污染请及时与我们取得联系。


四、HDMEC人真皮微血管内皮细胞培养操作

1、复苏细胞:将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻加入 4mL 培养基混合均匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟弃去上清液补加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入 10cm 皿中加入约 8ml 培养基培养过夜)。第二天换液并检查细胞密度。

2、细胞传代:如果细胞密度达 80%-90%,即可进行传代培养。

⑴弃去培养上清用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。

⑵加 1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中置于 37℃ 培养箱中消化 1-2 分钟然后在显微镜下观察细胞消化情况若细胞大部分变圆并脱落迅速拿回操作台轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

⑶按 6-8ml/瓶补加培养基轻轻打匀后吸出在 1000RPM 条件下离心 4 分 钟弃去上清液补加 1-2mL 培养液后吹匀。

⑷将细胞悬液按 1:2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。

3、细胞冻存:待细胞生长状态良好时可进行细胞冻存。


下面 T25 瓶为类;

⑴细胞冻存时弃去培养基后PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶细胞变圆脱落后 , www.yiqi800.com加入 1ml 含血清的培养基终止消化可使用血球计数板计数。

⑵4 min 1000rpm 离心去掉上清。加 1ml 血清重悬细胞根据细胞数量加入血清和DMSO,轻轻混匀DMSO 终浓度为 10%细胞密度不低于1x106/ml每支冻存管冻存 1ml 细胞悬液注意冻存管做好标识。

⑶将冻存管置于程序降温盒中放入-80 度冰箱2 个小时以后转入液氮灌储存。 记录冻存管位置以便下次拿取。


五、HDMEC人真皮微血管内皮细胞培养注意事项

1、收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好培养液是否有漏液、浑浊等现象若有上述现象发生请及时和我们联系。

2、仔细阅读细胞说明书了解细胞相关信息如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等确保细胞培养条件一致。若由于培养条件不一致而导致细胞出现问 题责任由客户自行承担。

3、用 75%酒精擦拭细胞瓶表面显微镜下观察细胞状态。因运输问题贴壁细胞会有少量从瓶壁脱落将细胞置于培养箱内静置培养 4~6 小时,再取出观察。此时多数细胞均会贴壁若细胞仍不能贴壁请用台盼蓝染色测定细胞活力如果证实细胞活力正常请将细胞离心后用新鲜培养基再次贴壁培养;如果染色结果显示细胞无活力请拍下照片及时和我们联系信息确认后我们为您再免费寄送一次。

4、静置细胞贴壁后请将细胞瓶内的培养基倒出留 6~8mL 维持细胞正常培养待细胞汇合度 80%左右时正常传代。

5、请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。培养瓶内多余的培养基可收集备用细胞传代时可以一定比例和客户自备的培养基混合使细胞逐渐适应培养条件。

6、建议客户收到细胞后前 3 天各拍几张细胞照片记录细胞状态便于和 Procell 技术部沟通交流。由于运输的原因个别敏感细胞会出现不稳定的情况请及时和我们联系告知细胞的具体情况以便我们的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7、该细胞仅供科研使用。


六、细胞的运输和保存

使用含有优质胎牛血清的2ml冻存管发送存活细胞。收到细胞后可在1000RPM常温条件下离心5min后于洁净操作台弃去上清加入推荐使用的培养基后转移至10cm培养皿或者T75培养瓶中培养传代达到细胞生长状态良好时再进行冻存。


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